Îndepărtarea celulelor dintr-un vas de cultură de sticlă este un pas crucial în multe procese de cercetare biologică și medicală. Ca furnizor de vase de cultură de sticlă de înaltă calitate, inclusivVasă Petri din sticlă pătrată,Vasă Petri de sticlă mare, șiVasă Petri cu fund de sticlă, înțeleg importanța acestei proceduri și necesitatea unei abordări bine executate.
Înțelegerea elementelor de bază ale aderenței celulare
Celulele dintr-un vas de cultură din sticlă aderă la suprafață prin diferite mecanisme. Ei folosesc proteine precum integrinele pentru a se atașa de matricea extracelulară sau de suprafața de sticlă în sine. Această aderență este esențială pentru creșterea, supraviețuirea și funcționarea celulelor. Cu toate acestea, când vine timpul să recoltăm celulele pentru analize ulterioare, trebuie să rupăm aceste legături adezive fără a provoca deteriorarea celulelor.
Pregătirea pentru îndepărtarea celulelor
Înainte de a începe procesul de îndepărtare a celulelor, este vital să se asigure un mediu steril. Aceasta înseamnă lucrul într-o hotă cu flux laminar și purtarea echipamentului personal de protecție adecvat, cum ar fi mănuși și halat de laborator. Toți reactivii și echipamentele trebuie sterilizate.
De asemenea, trebuie să selectăm reactivii potriviți pentru detașarea celulelor. Cei mai des utilizați reactivi sunt enzimele precum tripsina. Tripsina este o enzimă proteolitică care poate descompune proteinele responsabile de adeziunea celulă - suprafață. Pot fi utilizați și alți reactivi neenzimatici, cum ar fi EDTA (acid etilendiaminotetraacetic). EDTA chelatează ionii de calciu, care sunt necesari pentru aderența celulă - celulă și celulă - matrice.
Procesul pas cu pas de îndepărtare a celulelor
Pasul 1: Aspirați mediul de cultură
Mai întâi, utilizați o pipetă sterilă pentru a aspira cu atenție mediul de cultură din vasul de cultură din sticlă. Acest pas îndepărtează orice resturi și celulele neaderente. Fiți blând pentru a evita deranjarea celulelor aderente.
Pasul 2: Spălați celulele
După aspirarea mediului, adăugați un volum mic de soluție salină tamponată cu fosfat (PBS) în vas. PBS este o soluție de sare echilibrată care ajută la menținerea condițiilor fiziologice ale celulelor. Legănați ușor vasul înainte și înapoi pentru a spăla celulele. Apoi, aspirați PBS. Această etapă de spălare ajută la îndepărtarea oricăror componente medii rămase și a celulelor slab atașate.
Pasul 3: Adăugați reactivul de detașare
Apoi, adăugați reactivul de detașare corespunzător în vas. Dacă se utilizează tripsină, concentrația și timpul de incubare sunt critice. O concentrație comună de tripsină este de 0,25%, iar timpul de incubare este de obicei în jur de 2 - 5 minute la 37°C. Cu toate acestea, acest lucru poate varia în funcție de tipul de celulă. De exemplu, unele celule sunt mai sensibile la tripsină și pot necesita o concentrație mai mică sau un timp de incubare mai scurt.
Când adăugați tripsina, asigurați-vă că acoperiți întreaga suprafață a vasului uniform. Puneți vasul înapoi în incubator pentru a permite tripsinei să funcționeze.
Pasul 4: Monitorizați detașarea
În timpul incubației, verificați periodic celulele la microscop. Veți observa că celulele încep să se rotunjească pe măsură ce tripsina descompune proteinele de adeziune. Odată ce majoritatea celulelor sunt detașate, care pot fi văzute ca celule plutitoare în soluție, este timpul să opriți activitatea tripsinei.
Pasul 5: Neutralizați tripsina
Pentru a opri activitatea tripsinei, adăugați un volum egal de mediu de cultură care conține ser. Serul conține inhibitori de protează care pot inactiva tripsina. Pipetați ușor mediul în sus și în jos pentru a-l amesteca cu soluția de tripsină.
Pasul 6: Recoltați celulele
Utilizați o pipetă pentru a transfera suspensia celulară din vasul de cultură de sticlă într-un tub de centrifugă. Centrifugați tubul la o viteză adecvată (de obicei, în jur de 1000 - 1500 rpm timp de 5 - 10 minute) pentru a granula celulele. După centrifugare, se aspiră cu atenție supernatantul, lăsând peleta celulară în partea de jos a tubului.
Metode alternative pentru îndepărtarea celulelor
În unele cazuri, pot fi preferate metode non-enzimatice. De exemplu, metode mecanice pot fi folosite pentru a răzui celulele de pe suprafața sticlei. Acest lucru se poate face folosind o racletă celulară. Cu toate acestea, răzuirea mecanică poate fi mai dăunătoare celulelor în comparație cu metodele enzimatice.
O altă opțiune non-enzimatică este utilizarea unui mediu cu conținut scăzut de calciu. Prin reducerea concentrației de calciu din mediu, aderența celulă - celulă și celulă - matrice poate fi slăbită, permițând celulelor să se desprindă mai ușor.
Depanare
Uneori, procesul de îndepărtare a celulelor poate să nu decurgă la fel de bine cum era de așteptat. Dacă celulele nu se detașează corespunzător, aceasta ar putea fi din mai multe motive. Concentrația de tripsină poate fi prea mică sau timpul de incubare poate fi prea scurt. În acest caz, puteți încerca să creșteți ușor concentrația de tripsină sau să prelungiți timpul de incubare.
Pe de altă parte, dacă celulele sunt deteriorate în timpul procesului de îndepărtare, ar putea fi din cauză că concentrația de tripsină este prea mare sau timpul de incubare este prea lung. În astfel de situații, reduceți concentrația de tripsină și scurtați timpul de incubare.
Calitatea vaselor de cultură din sticlă și îndepărtarea celulelor
Calitatea vasului de cultură din sticlă poate afecta, de asemenea, procesul de îndepărtare a celulelor. Vasele noastre de cultură din sticlă sunt fabricate din sticlă de înaltă calitate, care oferă o suprafață netedă și curată pentru creșterea celulelor. Tratamentul de suprafață al vaselor noastre asigură o aderență adecvată a celulelor în timpul fazei de creștere și o detașare ușoară atunci când este necesar.
De exemplu, celVasă Petri din sticlă pătratăofera o suprafata mai mare in comparatie cu preparatele traditionale rotunde, ceea ce poate fi benefic pentru cresterea unui numar mai mare de celule. TheVasă Petri de sticlă mareeste ideal pentru experimente care necesită un volum mare de celule. Iar celVasă Petri cu fund de sticlăeste perfect pentru aplicațiile de imagistică, unde vizualizarea clară a celulelor este esențială.
Concluzie
Îndepărtarea celulelor dintr-un vas de cultură din sticlă este un proces delicat, dar esențial în cercetarea biologică. Urmând pașii corespunzători și folosind reactivii potriviți, putem asigura recoltarea cu succes a celulelor sănătoase. În calitate de furnizor de vase de cultură a sticlei, ne angajăm să oferim produse de înaltă calitate care să vină în sprijinul nevoilor dumneavoastră de cercetare. Dacă sunteți interesat să achiziționați vasele noastre de cultură de sticlă pentru experimentele dvs., vă așteptăm să ne contactați pentru mai multe informații și pentru a discuta cerințele dumneavoastră specifice.
Referințe
- Freshney, RI (2010). Cultura celulelor animale: un manual de tehnică de bază și aplicații specializate. Wiley - Liss.
- Sambrook, J. și Russell, DW (2001). Clonarea moleculară: un manual de laborator. Presa de laborator Cold Spring Harbor.